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熒光免疫層析技術定量檢測蓖麻毒素
關鍵詞：蓖麻毒素 熒光微球 免疫層析技術
摘要：為了建立免疫層析技術定量檢測蓖麻毒素試劑,首先依據蓖麻毒素對半乳糖的特異性結合能力,采用親和層析技術對蓖麻種子進行親和層析純化;其次采用凝膠過濾層析技術,獲得更純的天然蓖麻毒素純品;最后以天然的蓖麻毒素脫毒為免疫原,分別免疫獲得鼠抗相思中毒素單克隆抗體和兔抗蓖麻毒素多克隆抗體,利用獲得的鼠抗蓖麻毒素單克隆抗體作為標記抗體,標記羧基熒光微球(激發波長365nm,發射波長610nm)在NC膜上包被兔抗蓖麻毒素多克隆體作為檢測線、包被羊抗鼠IgG抗體作為質控線,建立蓖麻毒素雙抗體夾心定量檢測試劑,并對該試劑進行性能評價。結果顯示,純化后的蛋白經SDS-PAGE處理后,分為分子量為65kDa左右的單條帶、分子量為31kDa左右的雙條帶和33kDa左右的雙條帶,分別為Ricin毒素A鏈和B鏈。用TotalLab2.0軟件分析純化率為96%;檢測試劑配合熒光免疫檢測儀在0~50ng/mL的檢測范圍時,擬合曲線R2>0.990,線性范圍為1~10ng/mL,R2>0.990,最低檢出限為1ng/mL,且批間、批內重復性均小于15%。此法特異性良好,常溫穩定性14個月,樣本檢測能力良好,可在食品和環境中應用蓖麻毒素進行定量檢測。
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