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固定化胰蛋白酶整體小柱的制備及其用于微量蛋白質(zhì)的快速酶解
關(guān)鍵詞：制備 整體柱 蛋白質(zhì)組學(xué) 固定化酶 胰蛋白酶
摘要：發(fā)展了一種光引發(fā)聚合法制備固定化胰蛋白酶整體小柱的方法,以用于微量蛋白質(zhì)的快速酶解。整體小柱由功能單體4-戊烯酸琥珀酰亞胺酯、甲基丙烯酸羥乙酯,交聯(lián)劑季戊四醇三丙烯酸酯和三元致孔劑二甲基亞砜、N,N-二甲基甲酰胺、十二醇在20μL的移液器吸頭尖端原位聚合而成。形成整體柱后,胰蛋白酶分子通過氨基與琥珀酰亞胺酯反應(yīng)實(shí)現(xiàn)固定化。系統(tǒng)研究了聚合溶液中活性酯含量與柱床體積對(duì)胰蛋白酶固載量的影響,評(píng)價(jià)了固定化酶整體小柱對(duì)標(biāo)準(zhǔn)蛋白細(xì)胞色素C和牛血清白蛋白的酶解效率,以及整體小柱的穩(wěn)定性和重復(fù)性。結(jié)果表明,在離心輔助下,酶解過程可在10 min內(nèi)完成,批次間具有良好的重復(fù)性。最后將固定化酶整體小柱應(yīng)用于1×10^5個(gè)人急性早幼粒白血病(NB4)細(xì)胞與人急性T細(xì)胞白血病(Jurkat T)細(xì)胞的快速酶解,經(jīng)納升級(jí)液相色譜與高分辨質(zhì)譜聯(lián)用分析后鑒定得到2 489個(gè)和2 572個(gè)蛋白質(zhì)。相比于溶液狀態(tài)下的酶解,分別提高了2.2%和6.1%的蛋白鑒定數(shù)量,展現(xiàn)了其在蛋白組學(xué)研究中的應(yīng)用潛力。
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