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煙草合子時(shí)期表達(dá)基因NtZE1的克隆及結(jié)構(gòu)分析
關(guān)鍵詞：煙草 合子 基因克隆 生物信息學(xué)分析 基因表達(dá)活性檢測(cè)
摘要：通過分析煙草Nicotiana tabacum長形合子和卵細(xì)胞的cDNA差減文庫,獲得一條合子時(shí)期表達(dá)的基因NtZE1的EST序列。分析顯示,EST序列中含有315bp編碼序列,通過RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction)成功克隆到該序列。生物信息學(xué)分析顯示,NtZE1基因編碼105個(gè)氨基酸殘基;NtZE1蛋白為不穩(wěn)定的親水性蛋白,具有信號(hào)肽;蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)多為α-螺旋,軟件預(yù)測(cè)該蛋白可能定位于細(xì)胞外。利用Genome walking技術(shù)獲得ATG起始密碼子前共2578bp的5’側(cè)翼序列(啟動(dòng)子和5’UTR),將該序列連入EGFP核定位載體中并通過瞬時(shí)表達(dá)技術(shù)使其在小葉煙草N.benthamiana葉表皮細(xì)胞中表達(dá),有明顯的綠色熒光,證實(shí)所獲得的5’側(cè)翼序列具有啟動(dòng)基因表達(dá)的活性。
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